免疫研究黄金搭档：FCM、Luminex、ELISA
近期，Bio-protocol 期刊在线发表了“Mesenchymal Stromal Cell (MSC) Functional Analysis—Macrophage Activation and Polarization Assays”的方法文章。
该方案使用单核细胞分化为幼稚的巨噬细胞，这些巨噬细胞黏附松散，具有相对均一的遗传背景，类似于外周血单核细胞来源的巨噬细胞。
该方案通过向巨噬细胞中添加固定数量的新鲜解冻或培养的MSCs来提供共培养条件的定量测量。利用FCM、ELISA和Luminex的方法，展示了巨噬细胞表型的变化和分泌能力。
方法
1
巨噬细胞培养体系的建立
100 ng/mL PMA处理48 h后，不含MSC的THP-1巨噬细胞 (THP-1M)细胞松散贴壁。
🔹培养基：
🔹结果图：
2
共培养
🔹体系：
1:1或1:2的MSC:THP-1M（1×105 MSC:1×105巨噬细胞或0.5×105 MSC:1×105巨噬细胞）
🔹培基：
🔹时间：
24 h (ELISA Luminex) 3 d (FCM)
结 果
1
巨噬细胞活化
TNF-α——ELISA，其他指标均用Luminex检测
What About Luminex？
Luminex液相悬浮芯片系统是基于Luminex xMAP技术的检测系统。该技术的核心是把直径为5.6μm的聚苯乙烯小球用荧光染色的方法进行编码，通过调节两种荧光染料的不同配比获得最多可达百种具有不同特征荧光谱的微球，然后将每种编码微球共价交联上针对特定检测物的抗原、抗体或核酸探针等捕获分子。
应用时，先把针对不同检测物的编码微球混合，再加入微量待检样本，在悬液中靶分子与微球表面交联的捕获分子发生特异性结合，在一个反应孔内可以同时完成多达100种不同的检测反应。
最后用Luminex检测分析，仪器通过两束激光分别识别微球的编码和检测微球上报告分子的荧光强度。
🔹爆款指标：
🔹覆盖范围：
代谢疾病、感染性疾病、药物毒性测试、神经毒性测试、神经退行性疾病、肿瘤研究、信号转到研究等。包括细胞因子/化学因子检测 、免疫球蛋白分型检测、细胞信号转导检测、内分泌激素检测、神经因子检测、心血管因子检测、骨代谢因子检测、肾脏毒性研究检测、皮肤生长调控因子检测、代谢因子检测、凋亡及败血症因子检测等。
2
巨噬细胞极化测定
🔹圈门逻辑：
数据以CD14+活细胞(M1)或CD206+/CD14+(单阳性M2)、CD163+/CD14+(单阳性M2)或CD206+/CD163+/CD14+(双阳性M2)细胞的百分比表示。
🔹结果：
What About FCM？
流式细胞术（flow cytometry，FCM）是以流式细胞仪为检测手段的一项快速、精准的对单个细胞理化特征进行多参数定量分析的技术。
结合了荧光抗体的单细胞悬液在仪器内形成稳定的单细胞液柱，在激光照射下产生特异性荧光，同时根据细胞大小和胞内颗粒多少产生不同强度散射光。系统将收集到的光信号进行数据转换和分析，并以图像和数据显示，包括直方图、散点图、阳性细胞百分比、平均荧光强度等多参数资料。
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