免疫荧光

免疫荧光（IF），是应用抗原与抗体特异性结合的原理，通过荧光标记抗体对组织细胞内抗原进行定位、定性及定量的研究。免疫荧光技术可以对目的蛋白在细胞中的定位提供更高的分辨率、更高的灵敏度，是目前在细胞水平进行蛋白量（定性为主）及蛋白定位分析常用的方法。

1、二甲苯I浸泡20分钟
2、二甲苯II浸泡20分钟
3、梯度酒精(100、95、75)%脱水各5分钟
4、双蒸水冲洗浸泡1次，5分钟
5、3%双氧水浸泡,室温5-10min,或37°C10min
6、抗原修复:切片浸入0.01M柠檬酸盐缓冲液(PH6.0)，微波炉加热至沸腾后断电。自然冷却至室温。
7、PBS冲洗2次，每次3分钟
8、滴加5%BSA封闭液，室温20min
9.、甩去多余液体不洗
10、滴加适当稀释的一抗，超过组织边缘2mm，置于湿盒内4°C过夜或者37℃,1小时或20℃2小时
11、取湿盒于37°C温箱复温，30min
12、滴加二抗，37°C温箱孵育1小时(避光操作和存放)
13、PBS冲洗3次，每次2分钟
14、封片,拍照

15、4°C保存

1、荧光染色后一般在1h内完成观察，或于4℃保存4h，时间过长，荧光可能会淬灭。
2、实验对照设置越多，结果越可信。

1、无/弱染色
 烤片温度过高，推荐56℃-60℃，1-2h；
2、非特异性背景染色是否灭活内源性过氧化物酶孵育过程中干片抗原热修复过度
3、染色过深一抗浓度过高；染色试浓度过高或孵育时间过长；染色剂浓度过高或孵育时间过长。

1、新鲜或正确保存的样品（按照要求提供）
2、阳性对照样品（尽量提供）
3、相关文献（可选）

1、客户提供的实验样本
2、实验原始数据
3、完整实验报告
 

1、按照标准实验要求

2、双方签订合同后，收取70%预付后启动预实验
3、有特殊要求请咨询：400-800-8458