细胞凋亡
正常细胞的表面由不对称分布在质膜内叶和外叶上的脂质组成,这些脂质之一磷脂酰丝氨酸(PS)通常仅分布于膜的内侧。在细胞凋亡过程中,脂质不对称性消失并且PS暴露在质膜的外部。
AnnexinV是一种36kDa的钙依赖性的磷脂结合蛋白,能够与PS结合。因此,荧光标记的AnnexinV可用于检测暴露于早期凋亡细胞外部的PS。AnnexinV还可以染坏死细胞,因为这些细胞的膜破裂,使AnnexinV可以进入整个质膜,但是AnnexinV就无法区分坏细胞死(中晚期凋亡细胞)和早期凋亡细胞。因此,通过与碘化丙啶(PI)共染色,可以将凋亡细胞与坏死细胞(中晚期凋亡细胞)区分开,因为早期凋亡细胞和活细胞的细胞膜仍然完整,PI能进入坏死细胞(中晚期凋亡细胞)但是被早期凋亡细胞排除在外。
细胞凋亡又称细胞程序性死亡,是在一定的生理、病理情况下,机体为维护内环境的稳定,通过基因调控,在一系列酶的参与下,使生物体内一些无用的、老化的细胞高度有序、自动死亡的过程。凋亡是生物体内一种普遍存在的现象,贯穿于整个生命过程。
细胞凋亡有别于坏死,它具有自身的形态学特点和生化特征,形态上保持完整细胞膜结构的细胞皱缩,细胞核固缩,特异性胞浆大泡,染色质浓集,核破裂后被细胞膜包裹形成凋亡小体等。因凋亡细胞在组织中散在分布,细胞膜完整,不会引起局部炎症反应和损伤。
细胞坏死成团分布,细胞膜受损,DNA降解,细胞内容物外溢,会引起局部炎症和组织损伤。
1.线粒体膜电位的丧失
2.细胞膜PS(磷脂酰丝氨酸)的外翻
3.细胞核凝缩和断裂
检测特点:简便、快速、准确区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞,是最常用的凋亡检测方法。
检测方法:AnnexinV/PI凋亡检测试剂盒
1、分析后的结果图;
2、原始数据(FCS文件)。
1、客户提供实验样本(单细胞悬液),书面告知样本详细信息、实验方案和检测要求。2、单细胞悬液内的细胞状态应当符合实验目的且无污染,细胞数量原则上应当≥1×10⁶。
3、客户如提供人外周全血或小鼠全血样本,需要代为分离单个核细胞或者裂解红细胞的,分离PBMC每管血100元,裂解红细胞每管血50元。
4、不接收有致病性或传染风险的样本。
5、样本数量是根据实验设计的上机样本管数,不一定是客户提供的初始样品数目,必要的对照管参照样本管收费。
6、现阶段需客户自行送样,样本一律避光低温运输,建议将样品置于EP管运输,客户提供的试剂按照各具体保存条件运输。实验室原则上不保存实验后剩余样本,如有相关需求,请在实验开始之前书面说明。剩余的客户提供的试剂在实验结束后返还。
7、基于细胞样本的特殊性,送样时间仅限工作日,未固定细胞原则上应当在14:00之前送达,已固定良好的样本可在17:00之前送达。
实验室接收样本之日起二至四个工作日以内;