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近日,公司已搭建完善成熟的细胞表面蛋白标记检测、细胞内细胞因子检测、细胞周期检测及细胞凋亡检测等技术方法。可承接免疫功能评价、免疫保护与致病机制相关课题的支撑等技术服务。

目前主要使用BD FACSCantoII分析型流式细胞仪,配备二激光六通道,激光波长为488nm和633nm,可检测FITC、PE、PerCP-Cy5.5、PE-Cy7、APC和APC-Cy7及同等通道的荧光。

 
 
 
 
 

流式细胞术原理简介

流式细胞术(flow cytometry,FCM)是以流式细胞仪为检测手段的一项快速、精准的对单个细胞理化特征进行多参数定量分析的技术。结合了荧光抗体的单细胞悬液在仪器内形成稳定的单细胞液柱,在激光照射下产生特异性荧光,同时根据细胞大小和胞内颗粒多少产生不同强度散射光。系统将收集到的光信号进行数据转换和分析,并以图像和数据显示,包括直方图、散点图、阳性细胞百分比、平均荧光强度等多参数资料。

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细胞分型和细胞因子检测

利用荧光抗体标记细胞亚群特异性标志物、转录因子或细胞因子,通过FCM分析即可对细胞进行多参数分析。

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细胞凋亡检测

正常细胞的磷脂酰丝氨酸(PS)通常仅分布于膜的内侧,在凋亡过程中,膜脂质不对称性消失并且PS暴露在质膜的外部。Annexin V是一种钙依赖性的磷脂结合蛋白,能够与PS结合。因此,荧光标记的Annexin V可用于检测暴露于早期凋亡细胞外部的PS。通过与碘化丙啶(PI)共染色,可以将凋亡细胞与坏死细胞(中晚期凋亡细胞)区分开,因为早期凋亡细胞和活细胞的细胞膜仍然完整,PI能进入坏死细胞(中晚期凋亡细胞)但是被早期凋亡细胞排除在外。Annexin V/PI染色法能简便、快速、准确区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞,是最常用的凋亡检测方法。

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细胞周期检测

一个完整的细胞周期包含间期和分裂期(M期)两个阶段,间期又分为DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)和DNA合成后期(G2期),处于不同时期的细胞的DNA含量存在差异。G1期是二倍体细胞,S期细胞DNA含量逐渐增加,从二倍体变成四倍体,随后进入G2期,最终进入M期。检测细胞周期常用的方法是检测DNA含量,选择能与DNA结合的荧光染料(如PI),根据细胞各个时期DNA含量不同从而荧光强度不同,可以分析各个阶段的细胞比例。

 
 
实验服务内容及收费标准

注:样本数量是根据实验设计的上机样本管数,不一定是客户提供的初始样品数目,必要的对照管参照样本管收费

 

 

 实验周期 

实验室接收样本之日起二至四个工作日以内

 

 

 交付结果 

分析后结果图以及原始数据(FCS文件)

 

 

实验样本盒要求

 01
客户提供实验样本(单细胞悬液)书面告知样本详细信息、实验方案和检测要求。其中,样本信息至少应当包括细胞种属及来源、重悬缓冲液、标记抗体、样本管标记说明等,例如,人PBMC,Perm buffer重悬,CD3-FITC,IFNg-PE,样本管上unsti代表未刺激,con代表对照组,a管的抗体有CD3,b管的抗体有CD3和IFNg。
 02
单细胞悬液内的细胞状态应当符合实验目的且无污染,细胞数量原则上应当≥1×10
 03

客户如提供人外周全血或小鼠全血样本,需要代为分离单个核细胞或者裂解红细胞的,价格另议。不接收整块组织样本。

 04
不接收有致病性或传染风险的样本。
 05
除了检测样本,客户按需提供荧光抗体、商品化固定破膜试剂、同型对照抗体、死活染料、Fc阻断剂、补偿微球等。实验室可免费提供试管、PBS、染色缓冲液、多聚甲醛、实验中必要的少量1640培养基。如客户提供的抗体等试剂为自行分装的,还须提供试剂的品牌、货号以及有效期。
 06
现阶段需客户自行送样,样本一律避光低温运输,建议将样品置于EP管运输,客户提供的试剂按照各具体保存条件运输。实验室原则上不保存实验后剩余样本,如有相关需求,请在实验开始之前书面说明。剩余的客户提供的试剂在实验结束后返还。
 07
基于细胞样本的特殊性,送样时间仅限工作日,未固定细胞原则上应当在14:00之前送达,已固定良好的样本可在17:00之前送达。
08

荧光素选择建议:检测指标优先使用标记FITC、PE、APC、PerCP-Cy5.5的抗体,死活染料优先使用APC-Cy7通道(如eFluor 780)。

 

 
实验服务流程
 
 
 
 
2022年2月25日 18:00
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